細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術中細胞進行保種并長期保存的常用方法，其中細胞凍存液，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，不僅僅是說只是用來進行細胞的保存，在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關鍵作用，因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。
細胞凍存要取得好的效果，多采用血清、甘油或二甲基亞砜（DMSO）等作為保護劑，最大限度的保存細胞活力。這些物質有些能提高細胞膜對水的通透性，在緩慢冷凍過程中可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。同時，有些保護劑在細胞外也能減輕溶液中高濃度溶質對細胞的損傷，進一步避免細胞在冷凍和復蘇過程中受到損傷。滲透性保護劑DMSO和非滲透性保護劑血清（主要含白蛋白）是使用最為廣泛，效果最為穩(wěn)定可靠的。
此外，采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘，當溫度低于-25℃時可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(-196℃)。復蘇細胞采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。
現(xiàn)有凍存方法存在的問題：
1、DMSO對細胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，尋找其它替代物是最好的選擇。
2、血清，即使是純化得到的白蛋白，由于其動物來源的特性，會極大增加帶來病毒等感染物質的可能。而且，血清來源受限，價格昂貴，所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此，尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為必要。
3、目前，最成熟和最穩(wěn)定的凍存細胞技術是將加有保護劑的細胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而保持細胞的特性，在需要的時候經過復蘇程序，使得細胞重新生長增殖以用于實驗。細胞儲存在-196℃液氮中，理論上儲存時間是無限的，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經過程序降溫，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），最后才移至液氮罐中進行長期的儲存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。）
賽爾瑞成科學家團隊在細胞凍存領域進行了大量研究工作，分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無血清細胞凍存液”（貨號：CF0101） 和2020年研發(fā)了 “無血清低DMSO細胞凍存液”（貨號：CF0201；專利申請?zhí)枺?02010307890.6）。這兩款凍存液均是不含血清，含DMSO，非程序降溫、可-80℃長期冷凍保存的通用型細胞凍存液 ，區(qū)別在于“Cellregen無血清細胞凍存液”（貨號：CF0101）的DMSO含量為10%， “無血清低DMSO細胞凍存液”（貨號：CF0201）DMSO的含量為5%（與傳統(tǒng)細胞凍存液的對比可參考附表） ，產品均獲得了廣大科研工作者的喜愛。
鑒于某些類型的細胞對DMSO敏感，使用含DMSO的細胞凍存液可能會影響細胞的功能，賽爾瑞成繼續(xù)研究工作，開發(fā)出一款無血清、無DMSO、無毒性、非程序降溫、-80℃可長期冷凍保存的凍存液體系：CRD0無血清無DMSO細胞凍存液（貨號：CF0301）。
產品特點：
☆ 高安全性，不含血清及動物源成分，病毒、霉菌和支原體等污染可能性低，各批產品之間有更高的產品質量一致性。
☆ 無DMSO，對細胞無潛在的毒性作用。
☆ 細胞存活率高，無批次差異。
☆ 完全凍存液配方，可直接使用，方便簡捷。
☆ 可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經過費時的程序降溫過程（省時、省力、省錢），不需要采用程序降溫儀，更不需要放置在-196℃液氮。
☆ 可原位凍存，比如雜交瘤細胞的亞克隆，可以大規(guī)模減少工作量，避免污染。
CRD0無血清無DMSO細胞凍存液凍存效果：
圖1. 3T3細胞復蘇后細胞狀態(tài)圖 圖2. ATDC5細胞復蘇后細胞狀態(tài)圖
3T3細胞存活率>90% ATDC5存活率>90%
圖3 小鼠脾臟T細胞復蘇后細胞凋亡圖
三個批次復蘇率均>95%，且批次間凍存效果無明顯差異
附表：通用細胞凍存液，CRD10無血清細胞凍存液、CRD5無血清低DMSO細胞凍存液，CRD0無血清無DMSO細胞凍存液的比較
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通用細胞凍存液 |
CRD10 無血清 細胞凍存液 |
CRD5 無血清低 DMSO 細胞凍存液 |
CRD0 無血清無 DMSO 細胞凍存液 |
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主要成份 |
含血清， 含 DMSO |
不含血清， 含 DMSO 10% |
不含血清， 低 DMSO 5% |
不含血清， 不含 DMSO |
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細胞毒性 |
高 |
高 |
低 |
無 |
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安全性 |
低 動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風險偏高 |
高 無動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風險 |
高 無動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風險 |
高 無動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風險 |
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凍存細胞種類 |
適合含血清細胞凍存 |
通用型 適合各類細胞凍存 |
通用型 適合各類細胞凍存 |
通用型 適合各類細胞凍存 |
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無血清培養(yǎng)細胞生長狀態(tài) |
易改變易由懸浮狀態(tài)回復貼壁狀態(tài) |
保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
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批次差異 |
批次差異大 |
無批次差異 |
無批次差異 |
無批次差異 |
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操作方法 |
步驟繁瑣 需程序降溫凍存 |
簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
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保存設備 |
要求高（液氮） |
要求低（ -80℃ 冰箱） |
要求低（ -80℃ 冰箱） |
要求低（ -80℃ 冰箱） |
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微量凍存 |
細胞易死亡，存活率偏低 |
細胞存活率高 |
細胞存活率高 |
細胞存活率高 |
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原位凍存 |
不可行 |
可行，且方便快捷 如 : 雜交瘤細胞孔板凍存 |
可行，且方便快捷 如 : 雜交瘤細胞孔板凍存 |
可行，且方便快捷 如 : 雜交瘤細胞孔板凍存 |
