細胞凍存是細胞培養(yǎng)技術(shù)中細胞進行保種并長期保存的常用方法,，其中細胞凍存液,，作為細胞凍存時必須使用的一種溶液，不僅僅是說只是用來進行細胞的保存,，在細胞的購買、寄贈,、交換和運送過程中也起著關(guān)鍵作用,，因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。
細胞凍存要取得好的效果,，多采用血清,、甘油或二甲基亞砜（DMSO）等作為保護劑，最大限度的保存細胞活力,。這些物質(zhì)有些能提高細胞膜對水的通透性,，在緩慢冷凍過程中可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷,。同時，有些保護劑在細胞外也能減輕溶液中高濃度溶質(zhì)對細胞的損傷,，進一步避免細胞在冷凍和復(fù)蘇過程中受到損傷,。滲透性保護劑DMSO和非滲透性保護劑血清（主要含白蛋白）是使用最為廣泛，效果最為穩(wěn)定可靠的,。
此外,，采用“慢凍快融”的方法能較好地保證細胞存活。標準冷凍速度開始為-1到-2℃/分鐘,，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。復(fù)蘇細胞采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。
現(xiàn)有凍存方法存在的問題：
1,、DMSO對細胞存在一定的毒性,，用量受到限制，降低或者不使用DMSO,，尋找其它替代物是最好的選擇,。
2、血清,，即使是純化得到的白蛋白,，由于其動物來源的特性，會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能,。而且，血清來源受限,，價格昂貴，所以其使用也必然會受到越來越多的限制,。因此,，尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為必要。
3,、目前,，最成熟和最穩(wěn)定的凍存細胞技術(shù)是將加有保護劑的細胞懸液置于-196℃液氮中，這樣可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而保持細胞的特性,，在需要的時候經(jīng)過復(fù)蘇程序,，使得細胞重新生長增殖以用于實驗。細胞儲存在-196℃液氮中,，理論上儲存時間是無限的,，但是液氮凍存步驟繁瑣，需要經(jīng)過程序降溫,，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜）,，最后才移至液氮罐中進行長期的儲存,。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大,，造成細胞大量的死亡,。）
賽爾瑞成科學(xué)家團隊在細胞凍存領(lǐng)域進行了大量研究工作，分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無血清細胞凍存液”（貨號：CF0101） 和2020年研發(fā)了 “無血清低DMSO細胞凍存液”（貨號：CF0201,；專利申請?zhí)枺?02010307890.6）,。這兩款凍存液均是不含血清，含DMSO,，非程序降溫,、可-80℃長期冷凍保存的通用型細胞凍存液 ，區(qū)別在于“Cellregen無血清細胞凍存液”（貨號：CF0101）的DMSO含量為10%,， “無血清低DMSO細胞凍存液”（貨號：CF0201）DMSO的含量為5%（與傳統(tǒng)細胞凍存液的對比可參考附表） ,，產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛。
鑒于某些類型的細胞對DMSO敏感,，使用含DMSO的細胞凍存液可能會影響細胞的功能,，賽爾瑞成繼續(xù)研究工作，開發(fā)出一款無血清,、無DMSO,、無毒性,、非程序降溫、-80℃可長期冷凍保存的凍存液體系：CRD0無血清無DMSO細胞凍存液（貨號：CF0301）,。
產(chǎn)品特點：
☆ 高安全性,，不含血清及動物源成分，病毒,、霉菌和支原體等污染可能性低,，各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
☆ 無DMSO,，對細胞無潛在的毒性作用,。
☆ 細胞存活率高，無批次差異,。
☆ 完全凍存液配方，可直接使用,，方便簡捷,。
☆ 可直接存放于-80℃冰箱凍存，無需經(jīng)過費時的程序降溫過程（省時,、省力,、省錢），不需要采用程序降溫儀,，更不需要放置在-196℃液氮,。
☆ 可原位凍存，比如雜交瘤細胞的亞克隆,，可以大規(guī)模減少工作量,，避免污染。
CRD0無血清無DMSO細胞凍存液凍存效果：
圖1. 3T3細胞復(fù)蘇后細胞狀態(tài)圖 圖2. ATDC5細胞復(fù)蘇后細胞狀態(tài)圖
3T3細胞存活率>90% ATDC5存活率>90%
圖3 小鼠脾臟T細胞復(fù)蘇后細胞凋亡圖
三個批次復(fù)蘇率均>95%,，且批次間凍存效果無明顯差異
附表：通用細胞凍存液,，CRD10無血清細胞凍存液、CRD5無血清低DMSO細胞凍存液,，CRD0無血清無DMSO細胞凍存液的比較
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通用細胞凍存液 |
CRD10 無血清 細胞凍存液 |
CRD5 無血清低 DMSO 細胞凍存液 |
CRD0 無血清無 DMSO 細胞凍存液 |
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主要成份 |
含血清,， 含 DMSO |
不含血清， 含 DMSO 10% |
不含血清,， 低 DMSO 5% |
不含血清,， 不含 DMSO |
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細胞毒性 |
高 |
高 |
低 |
無 |
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安全性 |
低 動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險偏高 |
高 無動物來源病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險 |
高 無動物來源病毒,、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險 |
高 無動物來源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險 |
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凍存細胞種類 |
適合含血清細胞凍存 |
通用型 適合各類細胞凍存 |
通用型 適合各類細胞凍存 |
通用型 適合各類細胞凍存 |
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無血清培養(yǎng)細胞生長狀態(tài) |
易改變易由懸浮狀態(tài)回復(fù)貼壁狀態(tài) |
保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
保持懸浮培養(yǎng)狀態(tài) |
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批次差異 |
批次差異大 |
無批次差異 |
無批次差異 |
無批次差異 |
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操作方法 |
步驟繁瑣 需程序降溫凍存 |
簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
簡單快捷 一步凍存 -80 ℃冰箱 |
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保存設(shè)備 |
要求高（液氮） |
要求低（ -80℃ 冰箱） |
要求低（ -80℃ 冰箱） |
要求低（ -80℃ 冰箱） |
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微量凍存 |
細胞易死亡,，存活率偏低 |
細胞存活率高 |
細胞存活率高 |
細胞存活率高 |
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原位凍存 |
不可行 |
可行,，且方便快捷 如 : 雜交瘤細胞孔板凍存 |
可行，且方便快捷 如 : 雜交瘤細胞孔板凍存 |
可行，且方便快捷 如 : 雜交瘤細胞孔板凍存 |
