一,、產(chǎn)品簡(jiǎn)介
超級(jí)核酸酶CRGase是一種來(lái)源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens,，也稱靈桿菌)的非特異性核酸內(nèi)切酶,，也稱全能核酸酶或廣譜核酸酶。該核酸酶可在非常寬泛的條件下降解單鏈,、雙鏈、線狀,、環(huán)狀,、天然或變性等各種形式的DNA或RNA，產(chǎn)生長(zhǎng)度為3至5個(gè)堿基的5'-單磷酸寡核苷酸,。
本產(chǎn)品用途廣泛,，可用于在重組蛋白,、病毒疫苗、抗體藥物等生物制品生產(chǎn)過(guò)程中去除核酸,，或用于降低細(xì)胞,、組織、微生物等蛋白裂解液樣品的粘度等（可以用于化學(xué)破菌而省去超聲儀或高壓均質(zhì)機(jī),，或者結(jié)合化學(xué)破菌大幅度減少超聲儀或高壓均質(zhì)機(jī)的工作負(fù)荷）,。
本產(chǎn)品采用我公司自主研發(fā)的技術(shù)平臺(tái)表達(dá)、純化和制備,，分子量約為52.3kDa,。本產(chǎn)品活性部分與Serratia marcescens中的天然核酸內(nèi)切酶氨基酸序列完全一致。
二,、產(chǎn)品性質(zhì)
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來(lái)源 |
E. coli |
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分子量 |
52.3 kDa |
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純度 |
不小于 95% （ SDS-PAGE ） |
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等電點(diǎn) |
6.19 |
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酶活 |
不小于 200 U/μL |
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最適酶活 pH |
8.0-9.2 （工作范圍 pH 6.0-10.0 ） |
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最適酶活溫度 |
37℃ （工作范圍 0℃-42℃ ） |
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最適輔助因子 |
2mM Mg2+ （工作范圍 1-10 mM ） |
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蛋白酶活性殘留 |
未檢出 |
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保存緩沖液 |
10mM Tris (pH8.0), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% 甘油 |
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活性單位定義 |
在 37℃ ,， pH 8.0 反應(yīng)條件下，在 30 min 內(nèi)完全消化 37 μg DNA 成為寡核苷酸的酶量（相當(dāng)于使 △A260 吸收值變化 1.0 ）定義為一個(gè)活性單（ U ）,。 |
三,、產(chǎn)品用途
1）有效去除各種重組蛋白制備過(guò)程中的核酸殘留；
2）有效去除病毒疫苗和各種重組病毒中的核酸,，以符合國(guó)家食藥監(jiān)局相關(guān)指南中關(guān)于核酸污染的要求,；
3）有效降低細(xì)胞裂解液由于大量核酸存在而導(dǎo)致的粘度過(guò)大，以使裂解液易于后續(xù)操作,；
4）有效降低大腸桿菌或其它工程菌裂解液粘度,，大幅改善蛋白制備過(guò)程中菌體裂解液難過(guò)濾、難離心的問題,，節(jié)約設(shè)備和人力成本,；
5）在某些情況下，充分去除核酸可以提高包涵體蛋白的復(fù)性率,；
6）在實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定重組病毒滴度時(shí),，用于去除病毒包裝細(xì)胞的核酸和包裝質(zhì)粒污染；
7）有效防止細(xì)胞成團(tuán),，在細(xì)胞培養(yǎng)液中或某些細(xì)胞凍存液中加入適量超級(jí)核酸酶,，可以防止細(xì)胞成團(tuán)，以利于后續(xù)細(xì)胞分析和檢測(cè),。超級(jí)核酸酶沒有蛋白酶的活性殘留,，本身也不會(huì)對(duì)健康細(xì)胞造成傷害，因此是防止細(xì)胞成團(tuán)的理想選擇,。
8）在二維凝膠電泳(2-DE)的過(guò)程中,，加入核酸酶可以提高蛋白質(zhì)的分離效率和雙向電泳的分辨率。
四,、產(chǎn)品效果
五,、運(yùn)輸和保存方法
低溫運(yùn)輸（冰袋或干冰）,，-20℃保存，有效期3年,。4℃保存一個(gè)月,，酶活性沒有明顯變化。
六,、常見化學(xué)試劑兼容條件
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化學(xué)試劑 |
最佳條件 |
有效條件 |
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DTT |
0-100 mM |
可以大于 100 mM |
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2-Mercaptoethanol |
0-100mM |
可以大于 100mM |
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Triton X-100 |
-- |
小于 0.4% |
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Urea |
-- |
小于 5M |
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SDS |
-- |
小于 0.05% |
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磷酸根離子 |
0-10 mM |
0-100 mM |
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單價(jià)陽(yáng)離子（如 Na + , K+ , NH4 + ） |
0-20 mM |
0-150 mM |
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(NH4)2SO4 |
-- |
小于 100mM |
七,、使用方法示例（去除細(xì)胞裂解上清中的核酸）
1、樣本準(zhǔn)備
大腸桿菌：離心收集菌體,，用PBS或其它緩沖液清洗1次,，8,000 rpm離心5 min，收集菌體沉淀,。
貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞，去除上清,。
懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，用PBS清洗細(xì)胞，6,000 rpm離心10 min,，收集細(xì)胞沉淀,。
2、樣品處理
將收集到的菌體或細(xì)胞沉淀按照質(zhì)量（g）與體積（mL）比1：(10~20) 的比例進(jìn)行裂解處理,，可以在冰上或室溫通過(guò)機(jī)械或化學(xué)方法裂解細(xì)胞,。
3、酶的添加
按照250 Units消化1 g細(xì)胞沉淀的比例添加超級(jí)核酸酶,，也可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)自行選擇添加的酶量,，在一定范圍內(nèi)增加酶量，消化所需時(shí)間相應(yīng)減少,。
4,、上清獲取
以12,000 rpm的轉(zhuǎn)速高速離心10-30min，去除沉淀,，即獲得菌體或細(xì)胞裂解液上清,，再進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn),。
八,、注意事項(xiàng)
1）若溶液為高鹽溶液，偏酸性或者偏堿性,，含有較高濃度的去垢劑,、變性劑，應(yīng)適當(dāng)增加酶的用量或延長(zhǎng)孵育時(shí)間,。盡量按照上表“常見化學(xué)試劑兼容條件”表中的濃度范圍調(diào)整待處理樣品相關(guān)試劑的濃度,，以使酶活性處于最大,。
2）不建議-80ºC保存本產(chǎn)品，也不建議反復(fù)凍融,，有可能會(huì)降低產(chǎn)品的酶活性,，可以適當(dāng)分裝保存于-20ºC。
