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CRD系列無血清細胞凍存液使用常見問題匯總
發(fā)布時間:2025/3/5 14:08:00   點擊次數(shù):445次

 

        1、常規(guī)的細胞凍存主要采用DMSO+血清的方式,賽爾瑞成進行凍存液的無血清、低(無)DMSO、無蛋白這些方向持續(xù)開發(fā)的原因是什么?


        細胞凍存液的研發(fā)歷史可以追溯到20世紀中期,隨著細胞生物學和低溫生物學的發(fā)展,凍存液逐漸優(yōu)化和改進。20世紀60年代,DMSO成為常用冷凍保護劑,廣泛應用于細胞凍存。隨后,凍存液中開始添加胎牛血清(FBS)等成分,提供營養(yǎng)和保護。20世紀80年代,科學家優(yōu)化凍存液配方,調整DMSO和血清濃度,減少毒性并提高凍存效果。


        DMSO作為常用的冷凍保護劑,在較高濃度或長時間暴露下會對細胞產生毒性,影響細胞活力和功能。因此降低其濃度或尋找替代品是必要的。
血清因其成分復雜、存在批次差異、成分不明確、存在病原體污染風險等原因,應用無血清凍存液已成為細胞凍存領域主流。


        蛋白在凍存液中的添加可能為后續(xù)實驗和監(jiān)管引入不可控的變量,且高質量蛋白成本高,往往會提高凍存液的成本。


        賽爾瑞成自2018年推出第一款經典的無血清細胞凍存液以來,CRD系列無血清細胞凍存液因其過硬且穩(wěn)定的產品質量,獲得了國內數(shù)百家實驗室和企業(yè)用戶的認可,廣泛服務于國內細胞生物學研究和應用。

 


        2、應用CRD系列凍存液進行細胞凍存前需要注意什么?


        由于各類動物細胞株(系)通常都比較脆弱,對所處的環(huán)境要求較高,而細胞凍存是讓人工干預,強行讓細胞處于一種缺營養(yǎng)的“冬眠”狀態(tài),所以凍存之前的細胞狀態(tài)對凍存的效果非常關鍵,建議凍存之前,務必讓細胞處于良好的對數(shù)期狀態(tài),凍存之前細胞存活率應接近或達到100%。對于貼壁細胞,凍存之前,胰酶消化要適度,吹散和重懸動作要適當,以免損傷細胞狀態(tài)。過度消化或未輕柔吹打和重懸的細胞由于狀況較差,通常不宜再冷凍保存。觀察凍存前的細胞狀態(tài)應該在消化重懸完成后進行,以確認凍存時的細胞狀態(tài)良好。


        3、應用賽爾瑞成的CRD系列無血清細胞凍存液發(fā)現(xiàn)有的細胞凍存效果不好?有什么建議?


        CRD系列無血清細胞凍存液主要依據(jù)成分的差異進行產品命名,均為通用型細胞凍存液,經過廣泛測試驗證,適用于絕大多數(shù)哺乳動物(包括人)原代細胞、傳代細胞系以及雜交瘤細胞的凍存等。
        因為細胞來源各異、種類繁多,并且新的細胞株(系)不停的涌現(xiàn),甚至許多細胞都是經過工程化改造的細胞系,我們無法對市場上所有細胞株(系)進行全面驗證。因此,對于某些較為珍貴的細胞,建議用戶先進行短期(如一周以內)凍存效果預實驗,或者同時使用傳統(tǒng)含血清的常規(guī)凍存液進行對比測試,確認無誤后再進行正式批量凍存。


        4、凍存液瓶底出現(xiàn)沉淀,是不是產品質量出現(xiàn)問題?


        凍存液中沉淀的出現(xiàn)一般存在如下三種情況:


      (1)溶液配置、過濾分裝過程中,異物的帶入。賽爾瑞成的無血清細胞凍存液的生產過程均嚴格按照GMP體系進行管理,尤其在產品質檢和出庫前會進行雙重質檢,在外觀上能夠杜絕此類現(xiàn)象的發(fā)生。這種情況,在我們的產品中罕見發(fā)生。


      (2)溶液染菌。賽爾瑞成無血清細胞凍存液生產過程中有一個非常重要的步驟是用0.22μm孔徑濾膜進行除菌過濾,且整個操作過程是在百級的環(huán)境中進行操作。此外,我們會對每批終產品出廠前進行無菌檢測,確保終產品沒有染菌。


        為避免客戶在使用凍存液時,產生細菌污染,建議如下:
        ①在超凈工作臺或生物安全柜中進行操作,同時使用無菌的移液器、吸頭和容器,操作前后用75%乙醇或消毒劑清潔雙手。
        ②根據(jù)實驗需要,可以將大包裝凍存液分裝成小份進行保存,減少反復開啟瓶蓋帶來的污染風險;


      (3)鹽溶液析出
        為保證達到更優(yōu)的保護效果,CRD系列無血清細胞凍存液含有維持細胞狀態(tài)良好的復合鹽離子成分,因此,在低溫保存一段時間后,瓶底可能會出現(xiàn)少量飽和析出的固體鹽沉淀,經嚴格測試,對細胞凍存保護效果無任何不利影響,此時只需取用上清,正常使用即可,或者離心去除沉淀或者用過濾器(0.22μm孔徑濾膜)過濾去除少許沉淀。一般飽和析出不會發(fā)生第二次。


        若您在使用賽爾瑞成CRD系列無血清細胞凍存液過程中遇到任何問題,歡迎隨時與我們聯(lián)系。

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