現(xiàn)有凍存方法存在的問題:
1,、DMSO對細(xì)胞存在一定的毒性,用量受到限制,,降低或者不使用DMSO,,尋找其它替代物是最好的選擇。
2,、血清,,即使是純化得到的白蛋白,由于其動物來源的特性,,會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能,。而且,血清來源受限,,價格昂貴,,所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此,,尋找替代血清的非滲透性保護(hù)劑也顯得尤為必要,。
3、目前,,最成熟和最穩(wěn)定的凍存細(xì)胞技術(shù)是將加有保護(hù)劑的細(xì)胞懸液置于-196℃液氮中,,這樣可以使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而保持細(xì)胞的特性,在需要的時候經(jīng)過復(fù)蘇程序,,使得細(xì)胞重新生長增殖以用于實驗,。細(xì)胞儲存在-196℃液氮中,理論上儲存時間是無限的,,但是液氮凍存步驟繁瑣,,需要經(jīng)過程序降溫,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,,然后移至-20℃冰箱30分鐘,,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),最后才移至液氮罐中進(jìn)行長期的儲存,。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,,以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量的死亡,。)
賽爾瑞成科學(xué)家團(tuán)隊在細(xì)胞凍存領(lǐng)域進(jìn)行了大量研究工作,,分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”(貨號:CF0101) 和2020年研發(fā)了 “無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”(貨號:CF0201;專利申請?zhí)枺?02010307890.6)。這兩款凍存液均是不含血清,,含DMSO,,非程序降溫、可-80℃長期冷凍保存的通用型細(xì)胞凍存液 ,,區(qū)別在于“Cellregen無血清細(xì)胞凍存液”(貨號:CF0101)的DMSO含量為10%,, “無血清低DMSO細(xì)胞凍存液”(貨號:CF0201)DMSO的含量為5%,產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛,。
鑒于某些類型的細(xì)胞對DMSO敏感,,使用含DMSO的細(xì)胞凍存液可能會影響細(xì)胞的功能,賽爾瑞成繼續(xù)研究工作,,開發(fā)出一款無血清,、無DMSO、無毒性,、非程序降溫,、-80℃可長期冷凍保存的凍存液體系:CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液(貨號:CF0301)。
產(chǎn)品特點:
☆ 高安全性,,不含血清及動物源成分,,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性,。
☆ 無DMSO,對細(xì)胞無潛在的毒性作用,。
☆ 細(xì)胞存活率高,,無批次差異。
☆ 完全凍存液配方,,可直接使用,,方便簡捷。
☆ 可直接存放于-80℃冰箱凍存,,無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時,、省力、省錢),,不需要采用程序降溫儀,,更不需要放置在-196℃液氮。
☆ 可原位凍存,,比如雜交瘤細(xì)胞的亞克隆,,可以大規(guī)模減少工作量,避免污染,。
CRD0無血清無DMSO細(xì)胞凍存液凍存效果:
圖1. 3T3細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖 圖2. ATDC5細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞狀態(tài)圖
3T3細(xì)胞存活率>90% ATDC5存活率>90%
圖3 小鼠脾臟T細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞凋亡圖
三個批次復(fù)蘇率均>95%,,且批次間凍存效果無明顯差異
貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
目錄價格 |
CF0301 |
CRD0 無血清無DMSO細(xì)胞凍存液 |
100 mL |
890 |
CF0302 |
CRD0 無血清無DMSO細(xì)胞凍存液 |
500 mL |
3890 |