現(xiàn)有凍存方法存在的問題:
1、DMSO對細胞存在一定的毒性,用量受到限制,降低或者不使用DMSO,尋找其它替代物是最好的選擇。
2、血清,即使是純化得到的白蛋白,由于其動物來源的特性,會極大增加帶來病毒等感染物質(zhì)的可能。而且,血清來源受限,價格昂貴,所以其使用也必然會受到越來越多的限制。因此,尋找替代血清的非滲透性保護劑也顯得尤為必要。
3、目前,最成熟和最穩(wěn)定的凍存細胞技術(shù)是將加有保護劑的細胞懸液置于-196℃液氮中,這樣可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而保持細胞的特性,在需要的時候經(jīng)過復(fù)蘇程序,使得細胞重新生長增殖以用于實驗。細胞儲存在-196℃液氮中,理論上儲存時間是無限的,但是液氮凍存步驟繁瑣,需要經(jīng)過程序降溫,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),最后才移至液氮罐中進行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量的死亡。)
賽爾瑞成科學(xué)家團隊在細胞凍存領(lǐng)域進行了大量研究工作,分別于2015年研發(fā)了 “Cellregen無血清細胞凍存液”(貨號:CF0101) 和2020年研發(fā)了 “無血清低DMSO細胞凍存液”(貨號:CF0201;專利申請?zhí)枺?02010307890.6)。這兩款凍存液均是不含血清,含DMSO,非程序降溫、可-80℃長期冷凍保存的通用型細胞凍存液 ,區(qū)別在于“Cellregen無血清細胞凍存液”(貨號:CF0101)的DMSO含量為10%, “無血清低DMSO細胞凍存液”(貨號:CF0201)DMSO的含量為5%,產(chǎn)品均獲得了廣大科研工作者的喜愛。
鑒于某些類型的細胞對DMSO敏感,使用含DMSO的細胞凍存液可能會影響細胞的功能,賽爾瑞成繼續(xù)研究工作,開發(fā)出一款無血清、無DMSO、無毒性、非程序降溫、-80℃可長期冷凍保存的凍存液體系:CRD0無血清無DMSO細胞凍存液(貨號:CF0301)。
產(chǎn)品特點:
☆ 高安全性,不含血清及動物源成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。
☆ 無DMSO,對細胞無潛在的毒性作用。
☆ 細胞存活率高,無批次差異。
☆ 完全凍存液配方,可直接使用,方便簡捷。
☆ 可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢),不需要采用程序降溫儀,更不需要放置在-196℃液氮。
☆ 可原位凍存,比如雜交瘤細胞的亞克隆,可以大規(guī)模減少工作量,避免污染。
CRD0無血清無DMSO細胞凍存液凍存效果:
圖1. 3T3細胞復(fù)蘇后細胞狀態(tài)圖 圖2. ATDC5細胞復(fù)蘇后細胞狀態(tài)圖
3T3細胞存活率>90% ATDC5存活率>90%
圖3 小鼠脾臟T細胞復(fù)蘇后細胞凋亡圖
三個批次復(fù)蘇率均>95%,且批次間凍存效果無明顯差異
貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
目錄價格 |
CF0301 |
CRD0 無血清無DMSO細胞凍存液 |
100 mL |
890 |
CF0302 |
CRD0 無血清無DMSO細胞凍存液 |
500 mL |
3890 |